1. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,并盡量避免起泡。
1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
干4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
ABCB7ATP結(jié)合蛋白家族7抗體
ASCL2ASCL2蛋白抗體
phospho-Ataxin 1(Ser775)磷酸化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體
phospho-ATF1 (Ser63)磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
phospho-ATF2 (Ser480)磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53)磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51)磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr73 + Thr55)磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr71 + Thr53)磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
phospho-ATF2(Thr71)磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
ATF5活化轉(zhuǎn)錄因子5抗體
ATF6 beta活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體
ATICAICAR甲?;D(zhuǎn)移酶抗體
phospho-ATM (Ser794)磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體
ATP5EATP5E蛋白抗體
ATP5G2ATP5G2蛋白抗體
ATP6V0D2ATP6V0D2蛋白抗體
ATP6V1B2ATP6V1B2蛋白抗體
ATPIF1ATPIF1蛋白抗體
AttractinAttractin蛋白抗體
Phospho-Aurora B(Tyr12)磷酸化有絲分裂激酶B抗體
ARPM1肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白M1抗體
ABH1ALKB蛋白抗體
phospho-beta Actin (Tyr53)磷酸化β-肌動(dòng)蛋白抗體
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