培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品：

 18.75pg/ml兔子基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試盒293/hTLR5-HA

0.188ng/ml兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試盒293/hTLR6-HA

46.9pg/ml兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試盒293/mTLR1-TLR2

0.188ng/ml兔基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試盒 293/mTLR2-TLR6

0.094ng/ml兔主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA試盒293XL/hTLR7-HA

9.375pg/ml兔主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA試盒 293XL/hTLR8-HA

0.094ng/ml兔子主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISA試盒293XL/hTLR9-HA

0.094ng/ml兔子巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試盒293/h

37.5pg/ml兔子巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA試盒293/hNOD2

0.094ng/ml兔溶菌酶(LZM)ELISA試盒 293/hTLR2
人脈絡膜血管內(nèi)皮細胞角蛋白1(KRT1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人腦膠質(zhì)瘤細胞，A172細胞

α白蛋白(AFM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人腦膠質(zhì)細胞株(正常)，HEB細胞

白介素8受體β(IL8Rβ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人腦微管內(nèi)皮細胞，HBMEC細胞

巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶8(FUT8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤，U-87 MG細胞

溶質(zhì)載體家族16成員1(SLC16A1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤，U-118MG細胞

趨化因子C-C-基元受體5(CCR5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚肺成纖維細胞，HELF細胞

Canopy 2同源物(CNPY2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚肺成纖維細胞，MRC-5細胞

轉(zhuǎn)醇酶(TKT)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚肺成纖維細胞，WI-38細胞

肌球蛋白重鏈8(MYH8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚腎上皮包裝細胞，GP2-293細胞

B-淋巴酪氨激酶(BLK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚腎上皮細胞，293A細胞

電壓依性陰離子通道蛋白1(VDAC1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚腎細胞，293FT細胞

線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚腎細胞，293T細胞

組織蛋白酶Z(CTSZ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人胚腎細胞，AD-293細胞

低氧誘導因子2α(HIF2α)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人皮膚T淋巴瘤細胞，HUT-102細胞

黃嘌呤脫酶(XDH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)人皮膚成纖維細胞，HSF細胞