植物elisa試劑盒如何規(guī)范使用
瀏覽次數(shù):534發(fā)布日期:2021-09-26
植物elisa試劑盒基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合,此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型,出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此,可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒)檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定,這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái),使ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒)方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
用于標(biāo)記的酶用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩(wěn)定;反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn);能商品化生產(chǎn)。應(yīng)用較多的有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應(yīng)用廣。
純酶的RZ多在3.0以上,高達(dá)3.4。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶,非酶蛋白約占75%,不能用于標(biāo)記。RZ在2.5以上者方可用于標(biāo)記。HRP的作用底物為過(guò)氧化氫,催化反應(yīng)時(shí)的供氫體有幾種:(1)鄰苯二胺(OPD),產(chǎn)物為橙色,可溶性,敏感性高,吸收值在490nm,可用肉眼觀察判別,容易被濃硫酸終止反應(yīng),顏色可在數(shù)小時(shí)內(nèi)不改變,是國(guó)內(nèi)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒)中常用的一種;(2)聯(lián)大茴香胺(OD),產(chǎn)物為橘黃色,吸收值在400nm,顏色較穩(wěn)定;(3)5-氨基水楊酸(5-AS):產(chǎn)物為深棕色,吸收值在450nm,部分溶解,敏感性較差;(4)鄰聯(lián)甲苯胺(OT)產(chǎn)物為藍(lán)色,吸收值在630nm,部分溶解,不穩(wěn)定,不耐酸,但反應(yīng)快,顏色明顯。
堿性磷酸酶系從小牛腸粘膜和大腸桿菌中提取,由多個(gè)同功酶組成。它們的底物種類很多,常用者為硝基苯磷酸鹽,廉價(jià)無(wú)毒性。酶解產(chǎn)物呈黃色,可溶,吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反應(yīng)系統(tǒng)中,37℃1分鐘水解1μg磷酸苯二鈉為一個(gè)單位。